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1、離子對試劑作用原理
  “加入離子對試劑后，它可以與待分析的物質（多為在溶液狀態(tài)時顯以與離子對試劑相反的電荷）結合成離子對而呈中性，這樣非極性就表現(xiàn)出來，從而在色譜柱上有保留行為。”
   我覺得離子對試劑很像膠黏劑，一頭以離子吸引住待測物（也是離子），另一頭以碳鏈與固定性作用，從而把待測物保持在固定相上 。它的優(yōu)點和缺點，都是因為這樣的特性。
2、試劑選擇
   “離子對分為正離子對和負離子對，分析酸性樣品（確切的說應該是作用基團）用正離子對試劑，分析堿性樣品用負離子對試劑。
  正離子對試劑可以吸附帶負電荷的樣品組分，負離子對試劑反之。戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉……十二烷基磺酸鈉都屬于負離子對試劑；四丁基溴化銨、四丁基硫酸氫銨一類屬于正離子對試劑。
   離子對要考慮樣品體系的復雜性和干擾物的特性，先用原則一般盡可能使用碳鏈短的先，這樣可以避免強保留造成對柱子效能的影響，同時，濃度盡可能的低，以保證對柱子填料的穩(wěn)定性影響zui小及清洗方便。”
  看來做實驗下手輕點兒好，從碳鏈短的開始，從低濃度開始，不行再慢慢加。不過這次的使用經(jīng)驗是從碳鏈長度中等的開始，可以更快看到效果，節(jié)約摸索分析條件的時間。同時流動相PH值盡可能低以確保離子化程度。
 
3、試劑的使用
  “離子對試劑不一定是表面活性劑，如己烷和庚烷磺酸鈉，又如三乙胺或四丁基溴化胺，不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒有泡末，用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉（或硫酸鈉），或者十六烷基溴化鈉（CTAB,一種做陰離子用的陽性表面活性劑），在濃度高的時候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時流動相里加的SDS或CTAB濃度一般不會太高，一般在0.1%以下，而且流動相里有甲醇等有機溶劑，高濃度的有機溶劑有破乳的作用，因此，混合后的流動相泡末應該不會很多。另外，做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質SDS膠，或者毛細管電泳里的MECC，SDS濃度很高，而且沒有或者有很少比例的有機改性劑，當然會有氣泡，跟HPLC不*相同。”
達人們的意思我看明白了，就是有點泡沫不要怕，確保溶液搖勻就好。
使用離子對試劑時，調節(jié)保留時間的方式與普通反相不同，變化有機相比例沒有改變PH值來得有效。
     “當流動相PH值較高時，樣品以中性形式存在，那么正電荷較少，相應的保留較弱；當流動相PH值較低時，樣品便以質子堿H+形式的離子狀態(tài)存在，那么正電荷與固定相上帶負電荷的-SO3強烈吸附，相應的保留會非常強。”
  “再說明一下B物質的pKa，其值為10.5，在pH為4.5、3.8時都以離子態(tài)存在，這點沒錯，雖然都是離子態(tài)，都是99%以上，但從量上說還是有點不一樣的。任何物質以離子態(tài)存在時都有一個平衡的狀態(tài)：B＋（H＋）＝＝（BH＋），這里存在著一個平衡常數(shù)K（或者說離解常數(shù)），于是pH不同時，H＋不同，對應的B、BH＋也不同。所以才會出現(xiàn)pH不同，保留值會不同。
  另外我認為4.5和3.8的pH相差不大，其改變對物質的保留值影響不會很大，因為在流動相中還受到很多因素的影響。”